大家好，感谢邀请，今天来为大家分享一下【视频竞赛精选】六色流式细胞实验：细胞表面靶标染色展示的问题，以及和的一些困惑，大家要是还不太明白的话，也没有关系，因为接下来将为大家分享，希望可以帮助到大家，解决大家的问题，下面就开始吧！

本实验以小鼠脾组织中M1、M2巨噬细胞比例检测为例，重点介绍多色流式细胞术实验的样本制备、细胞计数和抗体染色操作方法及注意事项，以期提供指导用于多色流式细胞术实验。为需要细胞技术的同仁提供参考。

一、样品信息与耗材仪器

1.样本信息

小鼠脾脏组织细胞

2. 试剂及耗材

试剂：

预冷PBS、红细胞裂解缓冲液、封闭剂(CD16/CD32)、Brilliant染色缓冲液、各种抗体、染色缓冲液(FBS)

耗材：

手术剪刀、镊子、50 mL 离心管、70 m 网孔、5 mL 注射器、流量管

3、仪器及软件

乐器：

流式细胞仪、细胞计数器、低温离心机

软件：

二、实验操作

6色流式细胞术实验—细胞表面靶标染色

该作品荣获Bio-protocol第三届生物实验短视频大赛三等奖。请点击链接查看原视频：6色流式细胞术实验—细胞表面靶点染色—BIO-101

1. 单细胞悬液的制备

脱臼处死小鼠，酒精浸泡消毒，解剖取出，取出小鼠脾脏，用预冷的PBS清洗两次。将脾脏转移到固定在离心管上的网中，并使用5 mL 注射器的内芯进行研磨。用冷PBS 洗涤并离心（4，300g，5 min），收集下层细胞悬液，加入2 mL 红细胞裂解液，室温混合裂解5 min，加入2 mL 预冷却PBS，混匀，离心，弃上清，再次用2 mL 预冷PBS 洗涤，重悬于1 mL 预冷PBS。 2. 细胞计数

将混合好的10 L 单细胞悬液和10 L 台盼蓝混合并转移至细胞计数板。使用细胞计数器进行计数。 3. 抗体标记

根据10 细胞/管的数量将细胞分配到不同的流管中。将PBS 添加至1 mL/管。离心并洗涤后，将FSV510 单阳性管和样品管重悬于1 mL PBS 中，并将其他管重悬于1 mL PBS 中。重悬于100 L 染色缓冲液FBSFVS510 染色（死染和活染）：FVS510 单阳性和样品管，每管原液中加入1ul FVS510，涡旋，室温避光反应15 分钟，加入1 mL 染色缓冲液FBS终止反应，4C 350 g 离心5 分钟。倒出上清，用滤纸吸去残液，重悬于100 L染色缓冲液FBS中。封闭：除阴性管和FSV510单阳性管外，所有管均重悬于100 L染色缓冲液FBS中。添加2 L (1 g) Fc 块，4C 反应5 分钟。抗体标记：在样品管中加入50 L Brilliant染色缓冲液，涡旋，在每管中加入相应的抗体，4孵育30分钟。添加1 mL PBS，在4C 下以350 g 离心5 分钟。重悬于500 L 染色缓冲液FBS 中，过滤，上机。

三、注意事项

细胞样品在整个过程中必须保持在冰上，以确保细胞活力。根据实际情况调整离心参数，保证大部分细胞能离心至管底，保证细胞活力。添加封闭剂、活体染料和抗体后，需要轻微涡旋，以确保细胞和试剂均匀接触。单细胞悬液配制好后，应尽快染色并使用机器，以免因细胞活力下降而导致结果出现偏差。

四、作者及单位简介

万红叶，助理研究员，中国中医科学院针灸研究所流式细胞术技术平台负责人，承担/参与国家级项目10余项，发表论文38篇，其中20篇SCI论文，独立排名第一作者发表单篇文章最高影响因子17.52分，获省部级奖1项。

施一男，中国中医科学院针灸研究所流式细胞仪技术平台团队负责人、技术员。主要负责生化和分子生物学仪器的管理和培训。

单位介绍

中国中医科学院针灸研究所成立于1951年，是集科学研究、医疗保健、教育培训、期刊出版于一体的综合性研究机构。其前身是中央人民政府卫生部直属针灸治疗实验室。拥有多个先进的科研平台，每个平台均配备专业的技术带头人提供技术支持。

Bio-protocol 简介